-
Telefon
+86-0755 2308 4243
-
Adresse
Værelse 309, Meihua Building, Taiwan Industrial Park, No.2132 Songbai Road, Bao'an District, Shenzhen, Kina
-
E-mail
Ofte stillede spørgsmål
Hvilke syntesemetoder bruger Biorunstar til peptidsyntese?
RE: Biorunstar har udviklet forskellige løsningsfasesyntesemetoder for at imødekomme kundernes krav. Normalt anvendes fastfase Fmoc-kemi.
Hvordan sender du peptider? Hvilke QC-data vil blive leveret?
RE: Alle peptider vil blive sendt af DHL eller FedEx Express som i frysetørret pulver i individuelle velmærkede hætteglas ved stuetemperatur. Med undtagelse af råpeptider, som kun vil blive kontrolleret ved MALDI-MASS-spektrometri, leveres alle syntetiske oprensede peptider med projektrapport (CoA), MS-data og HPLC-data. Der vil blive leveret datablade, der indeholder nøglekarakteristika, såsom peptidsekvens, renhed, mængde, modifikation, massespektrumdata og HPLC-data.
Hvad er den typiske omløbstid for peptidsyntese? Hvor lang tid tager det at sende til mig?
RE: Vores typiske behandlingstid er 2-3 uger for et standardpeptid under 30 aminosyrer. Omløbstiden varierer afhængigt af peptidlængden, mængden, opløseligheden og sværhedsgraden. Typisk 3-5 dage til at nå forskere i andre lande.
Hvor længe kan du syntetisere?
RE: Biorunstar har stor erfaring med at syntetisere lange peptider, op til 130aa. I modsætning til mange peptidleverandører, som kun er trygge ved at lave peptider under 30 eller 40aa, har Biorunstar god erfaring med at lave peptider fra 40aa til 90aa. Det er vanskeligt at syntetisere lange peptider, især 100aa eller længere. Hvis du planlægger at syntetisere en sekvens på 130aa eller længere, bedes du kontakte os for tilpasset proteinekspression og oprensningsservice.
Hvad hvis der dukker nogle problemer op under syntese- eller oprensningsprocessen?
RE: Hvert peptid har sine specifikke egenskaber. Hvis der opstår nogle problemer under syntesen ud over vores forventning, og vi ikke kan levere dit peptid til tiden, vil vi informere dig så hurtigt som muligt. Ved et tilfælde, at vi ikke er i stand til at lave peptidet, vil du ikke blive opkrævet for nogen omkostninger.
TFA saltform, Acetat eller HCl saltform: Hvilken form skal jeg vælge?
Som standard syntetiseres peptider i TFA-salt. Til celle- eller vævskulturrelaterede eksperimenter bør du overveje at få peptider produceret i acetat- eller HCl-saltform på 98 % eller højere for at undgå unormale reaktioner. Acetat- eller HCl-saltform kan rekvireres mod merpris.
Hvad er et peptids holdbarhed?
RE: Peptider er stabile i minimum et år, hvis de opbevares lyofiliseret i fryseren. Hvis peptider opløses, kan holdbarheden reduceres. Hvis peptider indeholder flere reaktive aminosyrer, der kan oxideres som Trp, Met men især Cys, kan holdbarheden også blive reduceret.
Peptidet indeholder flere cysteiner og kan derfor nemt danne disulfidbindinger. Hvordan undgår jeg dette?
RE: Hvis peptidsekvensen indeholder flere cysteiner, eller andre reaktive aminosyrer, som let oxideres, tilbyder Biorunstar at levere peptidet med spor af den stærke reduktant DTT. Peptidet leveres kun med DTT, hvis dette specifikt er tilladt af kunden.
Hvordan opbevarer jeg mine syntetiske peptider?
RE: De fleste frysetørrede peptider vil være stabile ved stuetemperatur i 2-3 uger. Til langtidsopbevaring bør du opbevare frysetørrede peptider ved -20 grad. Gentagne fryse-tø-cyklusser bør undgås. Lad den nå stuetemperatur inden åbning. Holdbarheden af peptidopløsninger er begrænset; en peptidopløsning, når først er fremstillet, bør anvendes så hurtigt som muligt.
Hvad er renheden for det rå peptid og det afsaltede peptid? Hvordan renser du peptidet? Hvad er urenhederne?
RE: For korte peptider med normale sekvenser under 15aa er det generelt 40-60% ved HPLC for rå kvalitet; 50-70% ved HPLC for afsaltet kvalitet. Jo længere peptidet er, jo lavere er renheden for rå eller afsaltet. Peptider oprenses generelt ved HPLC under anvendelse af vand og acetonitrilgradient. De fleste urenheder er fragmenter eller deletionspeptider, ufuldstændigt afbeskyttede peptider og resterende salt og vand.
Forklaring af peptidrenhed ved HPLC, totalt peptidindhold og målpeptidindhold.
RE: Biorunstar sender peptider i henhold til bruttovægten af det frysetørrede pulver. Det frysetørrede pulver inkluderer urenheder såsom fragmenter eller deletionspeptider, ufuldstændigt afbeskyttede peptider, TFA og resterende vand. Peptidrenhed måles ved HPLC. Det er mængden af korrekt peptid i forhold til alle analytter, der absorberer ved ~214 nm (peptidbindingen absorberer), højst sandsynligt deletion, trunkering eller ufuldstændigt afbeskyttede sekvenser osv. Peptidrenhed ved HPLC tager ikke højde for vand og salte som normalt er til stede i prøven. Samlet peptidindhold er procentdelen af de samlede peptider, der er til stede i forhold til alt, der er til stede i det frysetørrede peptidpulver. Det samlede peptidindhold bestemmes ved analyse af nitrogenindhold. Målpeptidindhold i det frysetørrede peptidpulver kan således konkluderes med formlen: Total peptidindhold X Peptidrenhed ved HPLC.
Hvad er metoden til fluoresceinmærkning?
RE: FITC (Fluorescein isothiocyanat) er den aktiverede precursor, der bruges til Fluorescein-mærkningen. For den effektive Nterminale mærkning, en syv-atom aminohexanoyl
spacer (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) indsættes mellem fluoroforen (fluoroscein) og N-terminalen af peptidet. Denne spacer hjælper med at adskille fluoroforen fra dens fastgørelsespunkt, hvilket potentielt reducerer interaktionen af fluoroforen med biomolekylet, som den er konjugeret til, og gør den mere tilgængelig for sekundære detektionsreagenser.
spacer (NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-COOH) indsættes mellem fluoroforen (fluoroscein) og N-terminalen af peptidet. Denne spacer hjælper med at adskille fluoroforen fra dens fastgørelsespunkt, hvilket potentielt reducerer interaktionen af fluoroforen med biomolekylet, som den er konjugeret til, og gør den mere tilgængelig for sekundære detektionsreagenser.
Er C-terminal mærkning af biotin (eller FITC) mulig?
RE: Ja. C-terminal mærkning af biotin (eller FITC) udføres ved tilsætning af en lysinrest ved C-terminalen af et peptid, og biotin (eller FITC) er knyttet til lysinsidekæden via en amidbinding. Lysins positive ladning fjernes.
Hvad er den passende peptidlængde til antistofproduktion?
RE: Generelt anbefales et 10-25-restpeptid. Et længere peptid kunne have flere epitoper, men kunne også have en større chance for at danne stabile sekundære strukturer, som ikke er native former. Et kortere peptid (<10aa) is generally not good unless there are valid reasons for it, such as potential sequence homology with a related family member or other proteins.
Hvad er et MAP?
RE: MAPS eller Multi-Antigenic Peptide er et forgrenet peptid, hvor lineære peptidkæder er forbundet ved deres C-terminus via polylysinkerne, og derved øger størrelsen af hele molekylet. Dette gøres for at eliminere koblingen af peptider til KLH. Det ser dog ud til, at konformationen af peptider på MAP er mindre fleksibel, og antistoffer opnået ved MAP genkender typisk målprotein sjældnere end ved konventionel KLH-konjugation. Derudover produceres der ikke noget frit peptid ved fremstilling af MAPS, hvilket gør det vanskeligt at fjerne polylysinkerne-rettede antistoffer. Oprensning af MAPS ved HPLC er vanskelig, og MAPS leveres uden masseverifikation på grund af dets heterogenitet og store molekylære størrelse.
Hvorfor virker min KLH-konjugerede peptidopløsning uklar?
RE: KLH eller Keyhole Limpet Hemocyanin er et stort aggregerende protein (MW=4x105 – 1x107). På grund af dens størrelse og struktur er dens opløselighed i vand begrænset, hvilket forårsager et uklart udseende. Dette skal ikke påvirke immunogeniciteten, og den uklare opløsning kan bruges til immuniseringer.
Kan du forklare M+Na- og M+K-massetoppene i MALDI-spektre?
RE: Det er meget almindeligt at se Na (natrium) og K (kalium) addukter i MALDI spektret. Natrium og kalium kommer fra vandet, der bruges i peptidopløsningsmidlerne. Selv destilleret og deioniseret vand har spormængder af natrium- og kaliumioner, som aldrig kan fjernes helt. Disse bliver ioniseret under MALDI-massespecifikationsprocessen og binder til de frie carboxylgrupper i peptidet. Fordi der ikke er noget vandrensningssystem, der fjerner hver enkelt natrium- eller kaliumion fra vand, er det til tider meget almindeligt og uundgåeligt at se natrium- og kaliumaddukter i MALDI-massespecifikationer. Dette er ikke en indikation af, at peptidet ikke er rent, og det skal heller ikke forveksles med en forkert molekylvægt.